Základné podmienky pre bunkovú kultúru
1. Vhodné kultivačné médium pre bunky
Vhodné bunkové kultivačné médium je jednou z najdôležitejších podmienok pre bunkový rast a proliferáciu in vitro. Kultivačné médium poskytuje bunkovú výživu a základné látky na podporu bunkového rastu a proliferácie, ale poskytuje aj živé prostredie pre rast a reprodukciu kultivovaných buniek.
2. Vysokokvalitné sérum
V súčasnosti väčšina syntetických médií vyžaduje pridanie séra. Sérum je jednou z najdôležitejších zložiek bunkového kultivačného média, ktoré obsahuje rôzne rastové faktory a ďalšie živiny potrebné pre rast buniek.
3. Konštantná teplota rastu buniek
Na udržanie energického rastu kultivovaných buniek musí byť konštantná a primeraná teplota.
4. Vhodné plynové prostredie
Plyn je jednou z nevyhnutných podmienok prežitia buniek cicavcov a požadovanými plynmi sú najmä kyslík a oxid uhličitý.
5. Teplota bunkovej kultúry
Aby sa udržal energický rast kultivovaných buniek, musí existovať stála a vhodná teplota. Rôzne typy buniek majú rôzne požiadavky na teplotu kultivácie. Štandardná teplota pre kultúru ľudských buniek je 36,5 stupňa ± 0,5 stupňa . Odchýlka od tohto teplotného rozsahu ovplyvní normálny metabolizmus buniek a dokonca zomrie.
6. Vhodné plynové prostredie
Plyn je jednou z nevyhnutných podmienok na prežitie bunkovej kultúry cicavcov a požadovanými plynmi sú najmä kyslík a oxid uhličitý. Kyslík sa podieľa na cykle trikarboxylových kyselín, pričom produkuje energiu pre rast a proliferáciu buniek a syntetizuje rôzne zložky potrebné pre rast buniek.
Bežná kontaminácia bunkovej kultúry
1. Bakteriálna kontaminácia
Najčastejšie ide o bakteriálnu kontamináciu. Akonáhle je operácia mierne nesprávna, spôsobí kontamináciu buniek. Po bakteriálnej kontaminácii sa pri pozorovaní pod mikroskopom javí ako čierne tenké prúžky piesku. Tyčinkovité atď. Po druhé, kultivačné médium zožltne a zakalí, v Petriho miske sú zreteľne viditeľné jemné pieskovité sedimenty a z času na čas je cítiť zvláštny zápach.
2. Plesňová kontaminácia
Kultivačný roztok kontaminovaný hubami je číry a priehľadný, nie ako veľké prepuknutie bakteriálnej infekcie, takže je ťažké ho včas odhaliť. Niekedy to pod mikroskopom vyzerá ako vlákno, niekedy ako koral a pomaly vyrastie veľmi tenké čierne vlákno. Toto Keď je príliš neskoro, je pre bunky ťažké zachrániť sa.
3. Znečistenie plesňou
V súlade s plesňovými infekciami, pretože kultivačné médium je číre, je ťažké odhaliť plesňovú kontamináciu včas, keď je často príliš neskoro. V kultivačnom médiu sa pomaly objavovali vločkovité nečistoty a pod mikroskopom bolo možné vidieť vláknitú hmotu plávajúce predmety ako jahňatá vo vetre. Bunky môžu stále rásť, ale časom sa bunky zhoršia a prestanú rásť.
4. Mykoplazmová infekcia
Kultivačné médium sa zakalí. Keď mykoplazma infikuje bunky, cytopatické zmeny nie sú zrejmé, ale stav buniek sa zhoršuje a rast sa spomaľuje. Pod mikroskopom môžu byť malé čierne bodky, ale kultivačné médium vo všeobecnosti nie je zakalené. Po pasážovaní buniek sa objavili medzibunkové čierne škvrny, bunky boli vakuolizované a mnohé bunky pripomínali apoptózu a nekrózu. Nakoniec sa bunky vznášali a úplne zomreli.
Prevencia kontaminácie buniek
Stanovenie dobrých pravidiel a predpisov môže výrazne prispieť k zníženiu kontaminácie buniek. Vrátane prístupového systému, prevádzkových noriem a systému denného riadenia.
Prístupový systém: vrátane personálu a materiálu. Pred vstupom do laboratória musí byť personál vyškolený a musí spĺňať požiadavky na nosenie, ako sú biele plášte, izolačné plášte, masky, rukavice atď. Pre potrebné položky by sa mali prísne dodržiavať jednorazové položky. sterilizované a sterilizované a zakúpené položky je potrebné zakúpiť v bežných a spoľahlivých kanáloch. Novo zakúpené články by mali byť pred použitím testované a overené.
Prevádzkové špecifikácie: Najlepšie je formulovať špecifikácie pre rutinné operácie a laboratórny personál musí dodržiavať prevádzkové špecifikácie, ktoré sa nedajú ľubovoľne meniť, a tiež pestovať dobré prevádzkové návyky laboratórneho personálu. Napríklad po nasatí špičky pipety sa už druhýkrát nevysunie do média a raz sa nasaje dostatočné množstvo média. Pri pridávaní kvapaliny by sa mala kvapalina pridávať čo najviac v suspenzii, čo môže účinne zabrániť kontaminácii mykoplazmami a krížovej kontaminácii buniek. Okrem toho, ak je to možné, prevádzkujte naraz iba jednu bunkovú líniu a je lepšie mať medzi bunkami malý časový interval, aby sa zabránilo krížovej kontaminácii.
Systém denného riadenia: Zahŕňa pravidlá a metódy pre používanie, čistenie a údržbu prostredia a spotrebného materiálu, činidiel atď. vzorky buniek. Pre zdroje kontaminácie, ktoré nie je ľahké nájsť, je najlepšie vykonávať pravidelné testovanie, najmä mykoplazmovej kontaminácie a krížovej kontaminácie buniek.
BKMAM Bio poskytuje zodpovedajúci spotrebný materiál pre bunkovú kultúru:
Jednorazové plastové okrúhle/štvorcové Petriho misky:
Vysoko priehľadný polystyrénový materiál (PS);
Povrch je hladký a plochý a pri pozorovaní mikroskopom nedochádza k žiadnemu optickému skresleniu buniek;
Stohovací dizajn uľahčuje stohovanie a skladovanie;
sterilizácia etylénoxidom (EO);
Odolnosť voči opotrebovaniu a korózii.
Adherentné ošetrenie misiek na bunkové kultúry:
Polystyrénový materiál (PS);
Sterilizácia elektrónovým lúčom, žiadny pyrogén, žiadny toxín;
Povrchová úprava vákuovou plazmou, vynikajúca priľnavosť buniek;
Povrch je hladký a plochý a pri pozorovaní mikroskopom nedochádza k žiadnemu optickému skresleniu buniek;
Stohovateľný dizajn uľahčuje stohovanie a skladovanie.
Plastové platne na kultiváciu buniek:
Polystyrénový materiál (PS);
Vhodné pre normálnu bunkovú kultúru, neadherentný typ ošetrovacej platne;
Bez pyrogénu, bez toxínu, sterilizované;
Nezávislé balenie jednoduchého roztrhnutia, jednoduché ovládanie;
Adherentné ošetrenie platní s bunkovou kultúrou:
Polystyrénový materiál (PS);
Adherentné ošetrenie (TC ošetrenie) typ platne, vhodný na kultiváciu adherentných buniek;
Bez pyrogénu, bez toxínu, sterilizované;
Nezávislé balenie jednoduchého roztrhnutia, jednoduché ovládanie;
Všetky sú ploché.
Adherentné ošetrenie fliaš s bunkovou kultúrou:
Polystyrénový materiál (PS);
Sterilizácia elektrónovým lúčom, žiadny pyrogén, žiadny toxín;
Povrchová úprava vákuovou plazmou, vynikajúca priľnavosť buniek;
Priedušný obal, ktorý napomáha výmene plynov a zabraňuje prenikaniu mikroorganizmov.
Vnútorné/externé spinové kryoskúmavky:
100 percent čistý polypropylénový materiál (PP);
Vydrží 15 psi, 121 stupňovú sterilizáciu;
Stena trubice je zosilnená a telo trubice má stupnicu a oblasť písania;
Medzi závitom krytu potrubia a telom potrubia je silikónové krúžkové tesnenie, ktoré zaisťuje tesnosť;
Žiadna DNáza, žiadna RNáza, žiadny pyrogén, žiadny endotoxín.
