ELISA so zlým výsledkom?Sledujte nás a vyberte si ten správny tanier Elisa.
Výber vhodnej platničky ELISA je prvým krokom k úspešnému experimentu ELISA, no veľa ľudí to ignoruje. Keď ľudia robia experimenty, často zvažujú iba samotný experiment, ale nevedia, že produkt má často veľký vplyv na experiment. Správny výber produktov prispeje k úspechu experimentu. Pri vykonávaní experimentov ELISA zvyčajne zvažujeme nasledujúce faktory:
1. Tvar dna
V súčasnosti výrobcovia navrhujú enzýmom označené jamky ako nezávislé kolóny a vhodne zväčšujú vzdialenosť medzi jamkami, aby sa dali oddeliť nezávisle, čím sa minimalizuje krížová kontaminácia. Rôzne typy tanierov Elisa majú rôzne tvary dna studne. Tu sú niektoré bežné tvary dna otvorov:
Ploché dno: Dno je horizontálne, nazývané aj F dno. Svetlo sa nebude vychyľovať cez dno, ktoré môže prepúšťať svetlo v najväčšej miere. Použite na experimenty, ktoré vyžadujú okrúhle dno kvôli viditeľnosti alebo z iných dôvodov.
Okrúhle dno: Tiež známe ako U-dno, poskytuje najlepšie výsledky čistenia a hybridný výkon, vhodný pre aplikácie, ktoré potrebujú testovať sedimenty.
C-dno: Môže poskytnúť dobrý čistiaci účinok medzi plochým dnom a okrúhlym dnom, pričom kombinuje výhody plochého dna.
Kužeľové dno: Tiež známe ako V-dno, je vhodné na presné vzorkovanie a skladovanie mikrovzoriek pre optimálnu obnovu malých objemov.
2. Farba taniera Elisa
Tanier Elisa má tri farby: priehľadná, čierna a biela.
Väčšina testov ELISA si ako experimentálny materiál vyberá priehľadné platne. Biele a čierne doštičky Elisa sa vo všeobecnosti používajú na detekciu luminiscencie. Čierna platňa ELISA sama o sebe absorbuje svetlo, takže jej signál je slabší ako signál bielej platničky ELISA. Čierne doštičky Elisa sa vo všeobecnosti používajú na detekciu silnejšieho svetla, ako je fluorescenčná detekcia; naopak, biele doštičky Elisa možno použiť na detekciu slabšieho svetla a často sa používajú na všeobecnú chemiluminiscenciu a vývoj farby substrátu (ako je duálna luciferáza). analýza reportérového génu).
3. Materiál taniera Elisa
Bežnými materiálmi sú polyetylén (PE), polypropylén (PP), polystyrén (PS), polyvinylchlorid (PVC) a polykarbonát (PC).
Najpoužívanejšími materiálmi v ELSIA sú polystyrén a polyvinylchlorid. Polyvinylchloridová mäkká doska je tenká, dá sa rezať a cena je nízka. Nevýhodou je, že povrchová úprava nie je taká dobrá ako polystyrénová doska a dno otvoru nie je také rovné ako polystyrén. Zvýši sa však aj zodpovedajúca hodnota pozadia. Ošetrenie iónovým očkovaním sa zvyčajne vykonáva na povrchu doštičky ELISA a aktívne funkčné skupiny, ako sú aldehydové skupiny, aminoskupiny a epoxidové skupiny, sa zavádzajú do povrchu polyméru, aby sa zlepšil výkon povrchu substrátu.
4. rôzne väzbové mechanizmy
Účinné naviazanie poťahového materiálu na spodný povrch platne je kľúčovým krokom v ELISA. Preto by sa pred experimentom mali starostlivo analyzovať štrukturálne charakteristiky a chemické vlastnosti látky, ktorá sa má potiahnuť, aby sa vybrala vhodná platňa Elisa. Všeobecne povedané, existuje niekoľko spôsobov naviazania poťahového materiálu na spodok platne: pasívna adsorpcia, kovalentná väzba a afinitné zachytenie.
Pasívna adsorpcia: Mechanizmus pasívnej adsorpcie je zložitý a väzba medzi poťahovým materiálom a spodnou časťou platne závisí hlavne od medzimolekulových síl (van der Waalsova sila) a vodíkových väzieb. Vo väčšine testov ELISA sa väzba poťahovej látky na dno platne uskutočňuje pasívnou adsorpciou. Vo všeobecnosti sa väzba medzi antigénmi so strednou a veľkou molekulovou hmotnosťou (alebo protilátkami) a dnom platne uskutočňuje pasívnou adsorpciou. Pri výbere doštičky Elisa sa často zvažujú hydrofóbne/hydrofilné vlastnosti spodného povrchu platne. Nasledujúca tabuľka uvádza rozsah použitia a použitie rôznych povrchov hydrofilných substrátov:
hydrofilné | Prednostná väzba | Hlavné použitie |
- | Molekuly obsahujúce významné hydrofóbne oblasti, ako sú: lipidy, lipoproteíny, veľké proteíny | Antigénna ELISA, FLA, LIA |
plus | Biomolekuly s hydrofilnými/hydrofóbnymi vlastnosťami, ako sú: stredné až veľké proteíny, imunoglobulíny, albumín | Dvojitá protilátka sendvičová ELISA, antigénová ELISA |
plus plus | Biomolekuly s hydrofilnými/hydrofóbnymi vlastnosťami, ako sú: malé až veľké proteíny, imunoglobulíny, albumín, LPS, fosforylované proteíny, glykoproteíny | Dvojitá protilátka ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glykoproteíny, polárne lipidové molekuly, fosfolipidy, kardiolipidy | Antigénová ELISA |
Afinitné zachytenie: Afinitné zachytenie je založené na špecifickej väzbe značených makromolekúl na ich zodpovedajúce receptory. Označené makromolekuly možno získať buď chemickou väzbou alebo genetickým inžinierstvom.
Funkcie Affinity Capture sú:
1.vysoká špecifickosť
2. Môže zlepšiť pomer signálu k šumu výsledkov merania
Najbežnejšie povrchy dna jamiek sú: povrch potiahnutý streptavidínom (streptavidínom); povrch potiahnutý chelátom niklu (Nickel Chelate) a povrch potiahnutý glutatiónom (Glutatión, GSH).
3. Streptavidínový povrch: Vysoká afinita a špecificita streptavidínu a biotínu sa využívajú na realizáciu väzby spodnej platne na potiahnutý proteín.
4. Povrch chelátu niklu: Chelát niklu je pripojený k povrchu polyméru, aby naviazal fúzne proteíny s His (histidínovými) značkami.
5. Glutatiónový povrch: Použitie enzýmovej a substrátovej špecifickosti medzi glutatiónom a glutatión sulfhydryltransferázou (GST) na dosiahnutie väzby spodnej platne na obalový proteín.
Prečo si vybrať tanier BKMAM Elisa?
Vyrobené zo 100 percentného polystyrénového materiálu,
Vhodné pre adherentné bunkové kultúry,
Plochá základňa, rovnomerná hrúbka a jednotná veľkosť pre reakčné póly,
Sterilné s individuálnym balením,
Vysoká kvalita s výrobnou cenou.
